Analiza likvoru (CSF)

CSF (cerebrospinalna tekućina ili cerebrospinalna CSF) - biološka tekućina, potrebne za funkcioniranje CNS. Njegova studija jedna je od najvažnijih vrsta laboratorijskih testova. Sastoji se od pre-analitičke faze (priprema predmeta, prikupljanje materijala i njegova isporuka do laboratorija), analitički (zapravo radi istraživanja) i poslijeanalitičkih (transkript rezultat). Samo ispravno izvršavanje svih manipulacija na svaki od tih koraka određuje kvalitetu analize.

Cerebrospinalna tekućina (CSF), a formira se u koroidni pleksus komore mozga. U odraslim subarhnoidalnyh prostora istovremeno i cirkulira u klijetki mozga od 110-160 ml CSF, u spinalni kanal - 50-70 ml. Otopina se formira kontinuirano brzinom 0.2-0.8 ml / min, ovisno o intrakranijskog tlaka. U zdrave osobe dnevno formirana 350-1150 ml CSF.

Liker dobivena punkcijom spinalnog kanala, češće - lumbalne - u skladu s postupcima poznatih neurologa i Neurokirurzi. Njegove prve kapi su uklonjene ( „Cesta” krv). Zatim se otopina prikupi najmanje dvije cijevi: cijev u konvencionalnom (kemijski, centrifugi) za opći klinički i kemijsku analizu, sterilnu - za bakteriološku ispitivanja. Na obrascu upućivanje na CSF ispita liječnik treba odrediti ne samo ime pacijenta, ali i kliničku dijagnozu i svrhu istraživanja.

Treba imati na umu da se dostavljaju uzorcima laboratorijskih tekućine je potrebno zaštititi od pergrevaniya ili ohladi i uzoraka za otkrivanje bakterijski polisaharidi serogicheskih ispitivanja mora biti zagrijana na vodenoj kupelji kroz 3 min.

Stvarni laboratorijska ispitivanja cerebrospinalne tekućine (analitička faza) provodi se u skladu s pravilima prihvaćeni u kliničkom laboratoriju u analizi bilo biološke tekućine, a obuhvaća sljedeće korake:

- makroskopska analiza - procjena fizikalno-kemijska svojstva (veličina, boja, znakova)
- brojenjem stanica,
- Mikroskopije nativnog pripremu i citologija boji preparata-
- biokemijska istraživanja,
- Mikrobiološki ispitivanje (ako je navedeno drugačije).

Smatramo primjerenim i informativan u nekim slučajevima dopuni studiju CSF imunološke i eventualno - drugih ispitivanja, od kojih je značaj se raspravlja u literaturi.

Dekodiranje izvedba CSF

Normalno CSF ​​i bezbojna porozrachna (što je destilirana voda, koja u usporedbi s fizikalna svojstva općenito opisati CSF).

Siva ili sivo-zelena tekućina je obično uzrokovana primjese bakterija i leukocita. Crvena CSF različitih intenziteta (eritrohromiya) pokreće primjesom eritrocita javljaju kada je svježe krvarenje ili ozljede mozga. Vizualno pristutstvuyut eritrocita je otkriven kada je sadržaj više od 500-600 mikrolitara.

U patološkim procesima mogu biti tekući ksantohromnoy - obojeni žuto-smeđa ili žute produkata razgradnje hemoglobina. Također smatra da xanthosis lažno - Boja liker uzrokovane lijekovima. Rjeđe se susrećemo zelenkasti CSF (gnojni meningitis, mozak apsces). U literaturi se opisuje boju i korchnevy liker - prebacivanje karniofaringiom ciste u cerebrospinalnoj putu tekućine.

Zamućenje liker može biti zbog nečistoće krvnih stanica ili mikroorganizama. U potonjem slučaju, sumaglica može ukloniti centrifugiranjem. Kada je sadržaj u CSF povećana količina grube proteina postaje opalescentna.

Relativna gustoća likvoru dobivenog lumbalne punkcije, 1,006-1,007. Kada upala moždanih ovojnica, traume mozga relativne gustoće cerebrospinalne povećava fluida do 1.015. To smanjuje s prekomjernom likvora (hidrocefalus).

Kada je povišen nivo fibrinogena u CSF formira film ili fibrozni ugrušak koji se javlja češće tuberkuloznu meningitisa. Ponekad je cijev s tekućinom se ostavi na sobnoj temperaturi jedan dan (ako je potrebno kako bi se točno postaviti? - Da li film nastao). U prisutnosti fibrinozni njen filmski dissecting igle prenosi na staklenu ploču i obojeni s Ziehl-Neelsen ili drugim postupkom za identificiranje mikobakterije. Normalno CSF ​​98-99% vode.

Ipak, istraživanje kemijskog sastava je važan zadatak. To uključuje određivanje razine proteina, glukoze i klorida, te je dopunjena drugim pokazateljima u velikom broju slučajeva.

Protein u likvoru

Više od 80% proteina iz plazme CSF teče ultrafiltracije. Sadržaj proteina od norme u različitim dijelovima: ventrikularna - 0,05-0,15 g / l, cisternal 0,15-0,25 g / l, lumbalni 0,15-,35 g / l. Da se odredi koncentracija proteina u cerebrospinalnoj tekućini može se koristiti bilo koji od standardnih metoda (s sulfosalicilna kiselina i amonij sulfata, i drugi). Povećan sadržaj proteina u CSF (giperproteinarhiya) može biti zbog različitih čimbenika patogenetskih (Tablica 1).

Proučavanje CSF proteina omogućuje ne samo pojasniti prirodu patoloških procesa, ali i procijeniti stanje krvno-moždanu barijeru. Indikator za ove namjene mogu biti albumin, pod uvjetom da je razina u CSF određuje imunokemijskih metodama. Određivanje albumin se provodi u vezi s činjenicom da je, kao što je protein krvi ne sintetizira lokalno i zato može biti „marker” imunoglobulini infiltrirani od protoka krvi zbog smanjene propusnosti barijere. Simultano određivanje albumina u serumu (plazmi) krvi i likvora albumin nam omogućuje da izračunati indeks:

Kada je netaknut krvno-moždana barijera, ovaj indeks je manji od 9, s umjerenim oštećenjem - 9-14, uz primjetan - 14-30, s teškim oštećenjem - 30-100, a što je porast od više od 100 ukazuje na potpuni neuspjeh barijere.

Posljednjih godina veći interes za određenu CNS neurona bjelančevina tekućinu - enolaze, S-100, protein mijelinski bazični protein (MBP), i drugi. Jedan od najviše obećava među njima za kliničke svrhe čini se da MBP. U uobičajenom CSF praktički je odsutan (njegova koncentracija ne prelazi 4 mg / l), te se pojavljuje samo u patološkim uvjetima. Ovaj laboratorij značajka nije specifična za određene kliničkih entiteta, ali odražava veličinu lezija (uglavnom povezan s uništavanjem bijela krutina). Neki autori smatraju da je obećavajući definicija MBP u likvoru za praćenje neuroAIDS. Nažalost, danas i dalje postoje problemi vezani s izravnim određivanjem koncentracije proteina.

Glukoza u likvoru

Glukoza se nalazi u uobičajenom cerebrospinalnoj tekućini, u koncentraciji od 2.00-4.18 mmol / l. Ova vrijednost podložni značajnim promjenama čak i kod zdravih ljudi, ovisno o režimu prehrane, tjelesne aktivnosti i drugim čimbenicima. Točno procjenu razine glukoze u likvoru istovremeno odrediti njegovu razinu u krvi, gdje je inače 2 puta veća. Povišene razine glukoze u krvi (giperglikoarhiya) javlja u šećernoj bolesti, akutni encefalitis, ishemijski cirkulatorni poremećaji i drugih bolesti. Gipoglikoarhiya vidio s meningitisom raznih etiologija, ili sterilan upala, maligne lezije mozga i membrane, barem - s herpesom, subarahnoidnom krvarenja.

Neke prednosti nad glukoze kao dijagnostički marker je laktat (mliječna kiselina), kao što je njegova koncentracija u likvoru (1,2-2,1 mmol / l) je neovisno od one u krvi. Njegova razina je znatno povećana u različitim uvjetima povezane sa smanjenom energetskom metabolizmu - meningitisa, osobito - uzrokovana gram-pozitivnih flore, mozga hipoksije i nekih drugih.

Kloridi u likvoru

Kloridi - sadržaj normalnog likvoru - 118-132 mmol / l. Povećava koncentracije u likvoru opaža krši uklanjanja iz tijela (bubrega, srca) u degenerativnih bolesti i tumora CNS. Smanjenje sadržaja klorida označena encefalitis i meningitis.

Enzimi u likvoru

Tekućina se karakterizira niska aktivnost enzima sadrži. Modificiranje enzimske aktivnosti u CSF u različitim bolestima i općenito su nespecifični paralelno opisane promjene u krvi kod tih bolesti (Tablica 2). Drugačiji pristup zaslužuje tumačenje promjena u aktivnosti kreatin fosfokinaze (CPK). Ovaj enzim u tkivima tri frakcije, koje karakterizira ne samo molekularne razlike, ali i priroda distribucije u tkiva: CK-MB (miokarda), CK-MM (mišić), CK-BB (mozga). Ako ukupna aktivnost CK u CSF ne osnovni dijagnostičke vrijednosti (to se može povećati kada se tumor, cerebralnog infarkta, epilepsije i drugih bolesti), frakcija CK-BB relativno specifičan marker oštećenog tkiva mozga i njegova aktivnost u CSF korelaciji s Glasgow skali.

Broj stanica i cerebrospinalnog cytogram tekućina

U proučavanju bioloških tekućina i CSF, uključujući uobičajeno izračuna broj stanica u cytogram i mrlja obojenog azureozinom (Romanowsky-Giemsa Nocht, Pappenheim). Računajući staničnih elemenata u likvoru (određivanje cytosis) proizvedene pomoću Fuchs-Rosenthal komoru, pre-to uzgoj Samson reagensa 10 puta. Koristeći samo dao boju, nego bilo koji drugi. To omogućuje stanicama da mrlje tijekom 15 minuta, a stanice zadržavaju neizmijenjena do 2 sata.

Broj stanica tijekom stanice podijeli se 3 tako dobivene cytosis u 1 Ul. Za veću točnost, uzeti u obzir broj stanica u tri komore. Kada Fuchs-Rosenthal komora odsutnost Goryaeva mogu koristiti aparat, brojanjem stanica preko mreže kako u tri komore, rezultat je pomnožen 0.4. Do sada, ima odstupanja u jedinicama broja stanica - broja stanica u komori, na 1 mm ili 1 litre. Vjerojatno, zgodno je ipak izraziti broj stanica u cytosis mikrolitara. Kako izračunati broj bijelih krvnih stanica i crvenih krvnih stanica u likvoru mogu se koristiti i automatiziranih sustava.

Porast udjela stanica u CSF (pleocytosis) često pojavljuje kod upalnih bolesti, u manjoj mjeri - s meninga iritacije. Najistaknutiji pleocytosis vidio s bakterijskim infekcijama, gljivične oštećenja mozga i tuberkulozan meningitisa. U epilepsije, arahnoiditisom, hidrocefalus, degenerativnih procesa, i nekih drugih bolesti centralnog računati živčani sustav stanica ostaje normalan.

Bojanje stanica porijeklom pripreme reagensa Samson omogućuje dovoljno pouzdano diferencirane stanice. No, točnije njihove morfološke karakteristike postiže nakon fiksiranja i bojenja citoloških preparata pripremljenih. Suvremeni pristup u pripremi takvih proizvoda uključuje korištenje citospinu. Međutim, čak iu SAD-u imaju samo 55% od laboratorija. Stoga, u praksi, mnogo jednostavniji način - polaganje stanica na staklu slajd. Pripreme treba dobro osušiti na zraku, a zatim oslikana.

Obojeni uzorak su Broj stanica elemenata. Oni su uglavnom zastupa krvnih stanica (obično - limfociti i neutrofili, barem - monociti, eozinofili, bazofili) može zadovoljiti plazme i masne stanice, makrofage, Zrnati kugle (degenerativni oblik posebna vrsta makrofaga - lipofagov mogućnosti masna degeneracija), stanice arahnoendoteliya, epindimy , Morfologija tih stanica elemenata općenito dobro poznati liječnicima i laboratorijska dijagnostika je detaljno opisana u mnogim udžbenicima. Razina i priroda cytogram pleocytosis CSF omogućuje određivanje prirodu patološkog procesa (Tablica 3).

Leukocitoza često popraćeno akutne infekcije (lokalna i difuznog meningitis). CSF eozinofilija rijetko - kad mozak ehinokokoza, eozinofilni meningitisa. CSF eozinofilija ne korelira u pravilu s brojem eozinofila u krvi. Limfocitna pleocytosis CSF nastaje u meningitisa, multiple skleroze, kronične faze tuberkulozan meningitisa nakon operacija na membrane mozga. U patološkim procesima CNS uočeno polimorfizam limfocita, među kojima su aktivirane. Se karakterizira prisutnost obilne citoplazme s pojedinačnim blijedo azurofilnim granulama, neke stanice otshnurovku ili fragmentaciju citoplazmi (clasmatosis). Plazma stanice pojavljuju u cytogram virusnog ili bakterijskog meningitisa, subakutni upalnih procesa, tijekom oporavka od neurosyphilis. Monociti prolaze degeneracija u likvoru brže limfocita promatrane u multiple skleroze, progresivna panencefalitisom, kroničnu upalu tinja. Makrofagi - „bolničari” liker, pojavljuju se krvarenja, infekcije, traumatskih i ishemijske nekroze.

Ponekad CSF otkriti abnormalne stanice - elemente koji po svojim morfološkim karakteristikama ne može pripisati specifičnim staničnim oblicima. Atipičnih stanica se mogu naći u kroničnim upalnim procesima (tuberkulozan meningitisa, multipla skleroza i slično), a često su tumorske stanice. Vjerojatnost nalazi stanice raka u likvoru u tumorima mozga niska (manje od 1,5%). Otkrivanje visokih stanica u likvoru u hematoloških malignih bolesti sugerira neuroleukemia.

Analiza sastava otopine je važno procijeniti omjer proteina i staničnih elemenata (disocijacije). Kada stanični protein disocijacije navedeno pleocytosis izražena na normalni ili malo povećani sadržaj proteina. To je tipično za meningitis. Belkovokletochnaya disocijacije naznačen giperproteinarhiey pri normalnom cytosis. Ovo stanje je tipičan za postupke nepokretne u cerebrospinalne tekućine (putevima tumora, arahnoiditisom et al.).

Klinička situacije ponekad zahtijevaju računajući broj eritrocita u krvavom likvoru (za objektivizacije volumen krvarenja). Brojanje crvenih krvnih stanica su kao iu krvi. Kao što je gore navedeno, promjene boje liker ako u 1 mm sadrži više od 500-600 eritrocitimakunića vidljiv bojenje javlja u nazočnosti od oko 2000, a kad postane hemoragijski razinu eritrocita više od 4000 / L.

Mikrobiološko ispitivanje cerebrospinalnog likvora

Jedna od najčešćih bolesti CNS-a je gnojnog meningitisa. U takvim slučajevima, posebnu hitnost mikorobiologicheskoe studija. To uključuje indikativnu test - bacterioscopy droge i klasične tehnike kulture. Bacterioscopy liker ima ograničenu dijagnostičku vrijednost, osobito u pripravi prozirnog CSF. Razmaz pripremljen od likera mulja dobivenog centrifugiranjem okarshivayut metilen plavo ili Gram mrlje, iako neki autori smatraju da je najnovija verzija u boji „raniti” oblikovane elemente i stvara artefakte. Kada meningitis i apscesi naći raznovrsna flora odgovara prirodi bolesti. Bez obzira na rezultate mikroskopije bakterijskog meningitisa dijagnoze mora potvrditi pomoću testa za kulturu koji postaje odlučujući čimbenik u dijagnozi ove skupine bolesti i odabira odgovarajuće terapije. To se provodi u skladu s Red № 375 od Ministarstva zdravstva Ruske Federacije 23.12.98 „o mjerama za jačanje nadzora i sprječavanje meningokokne infekcije i gnojni bakterijski meningitis.” Najčešći uzrok bakterijskog meningitisa je gram-negativna Diplococcus Neisseria meningitidis, koja je 80% slučajeva može se otkriti čak i kada mikroskopije.

CSF mikroskopija

Normalno, u likvoru su prisutni samo limfociti i monociti. U raznih bolesti i patoloških stanja u likvoru mogu pojaviti druge vrste stanica.

Limfociti su slične po veličini crvenih krvnih stanica. Limfociti imaju veliku jezgru i uski rub citoplazme neobojenu. Inače, u cerebrospinalnoj tekućini sadrži 8-10 limfocite. Njihov broj povećan u tumora središnjeg živčanog sustava. Limfociti se javljaju u kroničnim upalnim procesima u ljuski (tuberkulozan meningitis, tsistitserkoznom arahnoiditis).

stanice plazme u likvoru. Stanice veće od limfocita, velikom jezgrom, smješten ekscentrično, velike količine citoplazmu s relativno malom količinom jezgre (veličine stanica - 6,12 mm). stanice plazme u CSF mogu naći samo u patološkim slučajevima, trajanje sadašnjih upalnih procesa u mozgu i membrane, s encefalitis, meningitis tuberkulozan, arahoiditis tsistitserkoznom i drugih bolesti u postoperativnom periodu, kada je trom zarastanje rana.

Fabric monocita u likvoru. Veličina stanica - od 7 do 10 mikrona. U normalnim tekućine ponekad se može pojaviti kao pojedinačne primjerke. Monociti su pronađena u likvoru nakon operacije na središnji živčani sustav, s dugim trenutnim upalnih procesa u školjkama. Prisutnost monocita tkiva govori o reakciji aktivnog tkiva i normalnog procesa zacjeljivanja.

Makrofaga u likvoru. Može imaju jezgre od različitih oblika, najčešće se nalazi na periferiji citoplazmi jezgre stanica sadrži vakuole i inkluzije. U normalnim CSF makrofagi ne dogodi. Prisutnost makrofaga u normalnog broja stanica u CSF je uočeno nakon krvarenja i upale. Tipično, oni se javljaju u postoperativnom periodu koji ima prognostički značaj i govori o aktivnosti pročišćene tekućine.

Zrnati kugle u likvoru. Stanice s masnom infiltracijom - uz prisutnost makrofaga u citoplazmi masnih kapi. U preparatima obojanih stanica cerebrospinalne tekućine imaju malu obodu nalazi jezgru i citoplazme gruba. Vrijednost stanice je različit i ovisi o uključenim masti kapljica. Granuliranih kuglice nalaze u patološkom tekućine dobivene iz ciste mozga u moždanom tkivu žarišta raspada u tumorima.

Neutrofili u CSF. Kamera je identičan u obliku neutrofila periferne krvi. Prisutnost neutrofila u CSF i u minimalnim količinama, ili ukazuje na prethodni, ili imaju upalnu reakciju. Prisutnost izmijenjenih neutrofila označava prigušenje upalnog procesa.

Eozinofila u CSF. Određen u likvoru ima jednoliku, sjajna zrna. Eozinofila pojaviti u SAH, meningitis, tuberkuloza i syphilitic tumora mozga.

Epitelne stanice u likvoru. Epitelne stanice, ograničavajući subarahnoidnog prostor, nalaze se u likvoru rijetko. Ovaj veliki stanice okrugle sa malim okruglim ili ovalnim jezgrama. Se nalaze u tumorima, ponekad s upalnim procesima.

Tumorske stanice i kompleksa u CSF. Oni se nalaze u stanici i obojeni pripremu likera. Maligne stanice mogu biti od sljedećih vrsta tumora:

•  meduloblastom;
•  spongioblastoma;
•  astrocitom;
•  rak.

Kristali u tekućini. Pronađeno u likvoru rijetko, ako tumor raspad.

Elementi u Echinococcus likvore- kuke scolexes, hitina ljuska fragmenti - u likvoru su rijetki.

PCR dijagnostika liker

Posljednjih godina neki obećanje u etioloških dijagnostički neuroinfections povezane s razvojem molekularnih tehnikama genetskog za otkrivanje nukleinskih kiselina infektivnih agensa u likvoru (PCR) za dijagnostiku.

Prema tome, tekućina je medij jasno reagira na patološke procese u središnjem živčanom sustavu. Dubina i karakter njegove izmjene su s obzirom na dubinu od patofizioloških poremećaja. Pravilna procjena laboratorij liquorologic simptoma pomaže razjasniti dijagnozu i procjenu učinkovitosti liječenja.