Imunosorbent testa (ELISA)

Imunosorbent testa (ELISA) - moderne laboratorijske testove, u kojima se pretraživanje vrši specifičnih protutijela u krvi ili antigena na određene bolesti, kako prepoznati ne samo uzrok, ali fazi bolesti. ELISA rezultati mogu se izdati i kvalitativno i kvantitativno.

Trenutno, ELISA se koristi u sljedećim slučajevima:

1) Pretraživanje specifičnih antitijela za bilo koje infekcije zabolevaniyu-
2) tražiti antigena bilo koje bolesti (, spolne infektivne bolesti) -
3) proučavanje hormonskog statusa patsienta-
4) za probir onkomarkery-
5) testiranjem prisutnosti autoimunih bolesti.

Prednosti ELISA:

1) visoke specifičnosti i osjetljivosti ELISA (preko 90%).
2) sposobnost da se odredi i praćenje dinamike proces bolesti, tj usporedbom količine antitijela u različitim vremenskim intervalima.
3) ELISA dijagnostički raspoloživost bilo medicinsku ustanovu.

Relativna nedostatak:

1) Određivanje imunog odgovora (antitijela), ali ne patogena.

osnovni pojmovi

Prije pojasniti suštinu ELISA metodom, kratko je shvatiti neke pojmove.
Antitijela (imunoglobuline ili - Ig) - specifične proteine ​​dobivene B -
limfociti (imunološke stanice) kao odgovor na unos u tijelo infektivnog uzročnika (virusa, bakterija, gljivica itd,). Luče imunoglobulin A (IgA), imunoglobulin E (IgE), imunoglobulin M (IgM), imunoglobulin G (IgG), imunoglobulin D (IGD). Oni razlikuju jedan od drugoga i tvore molekularnu masu poluživota sudjelovanje / nonparticipation u infektivnog procesa detektirati vrijeme od vremena infekcije. Ako uzmemo u obzir molekularne težine, najviše on IgM - je pentametar (950.000 Da), za razliku od ostatka Ig (150-200 000 Da), pa IgM jednostavno ne mogu proći kroz placentu. Stoga je otkrivanje IgM u djece od 1 godine života je uvijek znak infekcije fetusa. Većina serumskih imunoglobulina predstavljen IgG (75-85%), a najniža - IgE (0,003%). Infektivni proces izravno uključeni samo da IgA, M, G. IgE su znak alergijskih reakcija i uvjeta, i IgD - može se otkriti tek u limfnom čvoru i tonzila tkiva, igra važnu ulogu u oblikovanju lokalnog imuniteta.

klasa imunoglobulina

antigeni - velike molekularne težine organskih tvari, posebno su infektivni patogeni i druge bolesti, kao i različitih tvari modificirane stanice se proizvode u određenom bolesti (autoimunu bolest, rak).

imuni kompleks - antigen-antitijelo koji su uključeni u imunološkom procesu.

Na što je ELISA metoda.

Postoji nekoliko vrsta ELISA (izravni, neizravni, blokiraju metoda natjecatelja), ali u praksi najčešće koristi heterogenu ili enzimski imunološki test ELISA (enzimski vezanog imunosorbentnog ispitivanja)

Osnova imuno imunog odgovora antigen i protutijela kako bi se dobilo imunološki kompleks je: antigen-antitijelo, što je rezultiralo promjenom enzimske aktivnosti specifičnih oznaka na površini antitijela.

Suština metode ELISA

Jednostavno rečeno, ovaj proces može se podijeliti u nekoliko faza:

1) na površini ploče liječnik rupa, ispitivač je pročišćen antigen specifičnih bolesti. Prilikom dodavanja biološkog materijala (krv) u serumu za pacijenta specifične reakcije nastaje između antigena i željenog antitijela (imunoglobulina). Ova veza će djelovati kao „posebna antigen” u sljedeću fazu.

2) U ovoj fazi je formiranje IR (Imunološki kompleksi) - reakcijska između „specifičan antigen” i konjugata (to imunoglobulina označene s peroksidazom enzima). Dodano posebnu kromogen. Rezultat ove enzimske reakcije je formiranje obojenih tvari u jamice ploče, čiji je intenzitet boje ovisi o broju pacijenata imunoglobulina (antitijela) sadržanih u materijalu.

3) Nadalje tu Tumačenje: fotometrija pomoću višekanalnog spektrofotometar uspoređujući optičku gustoću ispitivanog materijala sa optičke gustoće od kontrolnih uzoraka, matematičke obrade rezultata. Količina protutijela u pacijenta ovisi o visini optičke gustoće u jažice.

Obično u praksi, korištenje 96 posudica.

Kada mjerenja optičke gustoće (OD) volumen uzorka tekućine izračunato (ili koncentracija) specifična antitijela u jediničnom volumenu. onda je rezultat u usporedbi s kontrolnim uzorkom.

To treba imati na umu:za svaki ispitni sustav razvijen je uzeti u obzir rezultate pojedinačne izvedbe, standarda učinka i patologije (tj „referentna vrijednost”). To treba uzeti u obzir prilikom ocjenjivanja rezultata svake analize slučaja. Ispravno tumačenje rezultata laboratorijskih „vrijednosti” drugi laboratorij. Također je netočna usporediti rezultate iz različitih laboratorija zajedno.

Prilikom postavljanja ELISA reakcije i ima vrijednost takvog koncepta kao afinitetom antitijela.
afiniteta protutijela - snaga veza antitijela na antigen i količina antigena koji se nalazi u međusobnoj s immnoglobulinami (antitijela). Pohlepnost je od velike važnosti pri procjeni navodnu zarazu pojma, što je iznimno važno u dijagnostici primarne infekcije u trudnica.

Osnova test antitijela sklonost obuhvaća tretiranje imunološki kompleks (antigen-antitijelo) uree otopine, kako bi se uništili proteina. Vysokoavidnye veze ostaju netaknuti i nisku sklonost uništen. Rezultat se navodi kao indeks sklonost, izražen kao postotak (%).

Što bolesti otkriven ELISA dijagnostiku?

Infektivne bolesti 1.
1,1 Virusni hepatitis A (IgM, G), B antigene -HBsAg, HBsAg, protutijela IgM - HBcorAg, Ig, ukupni HBcorAg IgG HBeAg), C (antitijela Ig M, G HCV), D (IgM, G), E (Ig M, G) i drugi.
1.2 HIV infekcije (IgG)
1,3 infekcije citomegalovirusom (protutijela IgM, G)
1.4 Epstein-Barrov infekcija ili mononkleoz (antitijela IgM, G EA VCA, NA virusni proteini)
1,5 herpetična infekcija (antitijela IgM, G)
1,6 toksoplazmoza (antitijela IgM, G)
1,7 Rubeola (IgM, G)
1,8 Morbile (IgM, G), bruceloza (IgM, G), Pseudotuberculosis (IgM, G), SALMONELOZE (IgM, G), šigeloze i dizenterija (IgM, G), aspcrgiloza (IgM, G), krpeljnog encefalitisa, borreliozu i mnogi drugi.
1,9 parazitoze (giardijaza, toxocariasis, trihinoza, opistorhoz, ehinokokoza, alveococcosis i drugi) u kojoj je detektiran IgG
1.10 STD (spolno prenosive bolesti kroz) - mikoplazmoza (IgM, G), Ureaplasmosis (IgM, G), Chlamydia (IgA, M, G), sifilis (IgG)
1,11 Helicobacter infekcija (IgG)

2. Oznake koje je autoimuna bolest i ljudski imuni sustav indikatori (Ukupni IgE, ukupno IgG, IgA ukupno, ukupno IgM, IgD ukupno, izlučeni IgA, IgG 2, IgG4, CRC cirkulira imuno komplekse, IgA i IgG antitijela glutenski epitopi i drugi)

3. Onkologichsekie markeri (TNF - faktor nekroze tumora, CEA - karcinoembrionski antigen, PSA - specifični antigen prostate, hCG - humani korionski gonadotropin, CA 125, alveomutsin i mnogi drugi)

4. U reproduktivnih poremećajaI (estradiol, progesteron, prolaktin, testosteron, AFP AFP-, FSH - hormon za stimulaciju folikula i drugi)

5. štitnjače bolest (Slobodni i vezani T3, T4, tiroglobulin, tiroidni peroksidaza - TPO, tiroidni stimulirajući hormon - TTG).

Ovaj popis nipošto nije sve bolesti dijagnosticira pomoću ELISA.

Materijal za ELISA analize i pravila ograde njegovih

Najčešći materijal za reakciju IFA - serumu pacijenta, na prazan želudac. Materijal također može poslužiti kao likvora, amnionske tekućine staklastog sadržaja, sluz iz cervikalnog kanala i uretre briseva.

Priprema bolesnika za isporuku materijala za IFA

Krv se uzima na prazan želudac. Prije dostave krvi ne moraju poduzimati nikakve lijekove. Specifični tretman (antibakterijski, antivirusno, antiparazitno, i slično) mora se zaustaviti najmanje 2 tjedna prije ispitivanja.

IFA Uvjeti proizvodnje

ImmunoadsorbentAssay test materijal čvrsto drži tijekom dana. Kašnjenje može biti u različitim laboratorijima zbog nakupljanja određenu količinu seruma.

Mogući rezultati ELISA dijagnostiku

U procjeni rezultata određenih infekcija važna klasa antitijela identificiranih i njihov broj. To utječe ne samo na pitanje o nastanku infekcije (tj to ili ne), no procjenjuje se stadij bolesti (akutne i kronične), kao i prisutnosti aktivne infekcije (akutna ili pogoršanja kroničnog) u vrijeme istraživanja.

Koji su približno u vrijeme antitijela (imunoglobuline) - Ig?

Najraniji IgM antitijela. Se mogu identificirati kroz 1-3 tjedna nakon mogućih infekcija koje karakteriziraju akutne faze infekcije. Druga situacija je izgled IgM antitijela - aktivacije (ili pogoršanje) kronični proces. IgM antitijela prometovati u prosjeku oko 3 mjeseca, a zatim se njihov broj postupno nestaje. Međutim, u nekih bolesnika, tragovima IgM može se otkriti u roku od 1-2 godina nakon infekcije.

Moderni sustavi za ispitivanje su vrlo osjetljiva, tako da su nespecifični lažni pozitivni rezultati (često u trudnica). Dakle, pozitivan IgM u ovoj skupini bolesnika treba ponovno provjeriti!

IgA antitijela pojavljuju 2-4 tjedna nakon infekcije, ali u količini koja je dovoljna da otkrije - mjesec dana. Serum IgA sintetiziraju plazma stanice slezene, limfnih čvorova i mukozne sekretornih IgA koncentrira na sluznicu obavljati svoju funkciju - uključeni u lokalnoj imuniteta.

Na 4. tjednu nakon infekcije početi prikazivati IgG antitijela. U većini infekcija titra postupno povećava, a najviše u različito vrijeme (u prosjeku 1,5-2 mjeseca), a zatim titar ostao na niskoj razini i pokazuje imunitet. U nekim bolestima (mikoplazmoza, klamidija, Trihomonijaza) razina IgG nije visoka, znatno je smanjena zbog nedostatka imunosti u ovih infekcija.

detekcija izvedbe antitijela različitih klasa:

- Izolirano IgM antitijela za detekciju podrazumijeva postojanje primarni
infekcija.
- Istovremena detekcija krvi IgM i IgG tipična za primarne infekcije
u zadnjih 2-3 mjeseci, kao i pogoršanje kroničnih bolesti. Dakle, prisutnost IgM u trudnoći nije uvijek pokazatelj početne infekcije.
- Detekcija IgG izolirati i može ukazivati ​​na imunitet na bolesti,
i kronične infekcije. U drugoj situaciji je postavljen i količini antitijela (titra) i promjene u dinamici titra. Tipično, studije su provedena u razmaku od 2-4-6 tjedana.
- Detekcija IgA i IgM izolira pokazuju primarne infekcije. u
zajedno s pojavom IgA IgG pretpostavlja aktivaciju kronične infekcije (prosjek od 2 tjedna vremena pogoršanja).

definicija IgG antitijela stupnja afiniteta je savršena dopuna dijagnostici primarnog stadija infekcije dugogodišnje infekcije koja ima svoje kliničko značenje, osobito pri procjeni rizika od intrauterine infekcije fetusa. Otkrivanje niskim stupnjem afiniteta IgG pokazuje primarne infekcije i identificira prosjeku nakon 4-6 mjeseci nakon infekcije, rijetko duže. Niska afiniteta IgG zahtijevaju drugi laboratorijska dokaz primarne infekcije (IgM). Visokim afinitetom antitijela ili znak bolesti i kroničnih ili akutnih formirane imuniteta.

Osobito u dojenčadi:u djece mlađe od jedne godine, a ponekad čak 1,5 godina u krvi cirkulira majčinska IgG antitijela na različite infekcije (tj, bilo je njihov prodor kroz placentu od majke na fetus u maternici). To samo po sebi nije znak prisutnosti infekcije u sadašnjosti. Ako u dobi od takjm otkriti IgM (podsjetiti da je majčinska IgM prolaze kroz placentu ne smiju), to je znak infekcije ili intrauterinog infekcije stečene nakon rođenja.

Kvantitativne ELISA metode

Rezultati ELISA dijagnostiku (koristeći enzima imunometodom analizator) izdaje se u posebnim jedinicama:
- Optička gustoća (OD) u uzorku - koncentracija specifičnih antitijela po jedinici volumena. Je veća OD uzorka, što je veća koncentracija protutijela. Neki rezultati sugeriraju faktor pozitivnost (ITA) - također je optička gustoća uzorka.
- Jedinica koncentraciji antitijela (ng / ml ili ng / ml).
- U titra seruma: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 i tako dalje. Dijagnostički titri (na kojoj je dijagnosticirana bolest, nego činjenicu infekcije) za različitim bolestima.
- U obliku simbola - "+", "-" (+, ++, +++, ++++) "?".
- U kvalitativnom vrednovanju kriterija vrijednosti (pozitivan ili negativan).

Ispravno procijeniti količinu antitijela varijante imunoglobulina identifikacije klase, a time i izložiti fazi bolesti i potrebu samo liječnik može liječiti.

Ne smijemo zaboraviti da je njihova „referentna vrijednost” (realizacije norma), a iznad kojeg se određeni dijagnosticirana bolest (varijante patologiju) razvijen za svakog testnog sustava. „vrijednosti” za različite sustave za ispitivanje različitih.

Ispravan usporedbom rezultata ELISA, preuzeo vremena, moguće je samo u slučaju njihove proizvodnje u istom laboratoriju.