PCR dijagnostiku - analiza na infekciju

Lančana reakcija polimeraze (PCR) - preciznost od genetskoj dijagnozu, koji omogućuje da osoba prepoznati različite zaraznih i nasljedne bolesti, i akutne i kronične faze i prije i bolest može manifestirati.

Lančana reakcija polimeraze (PCR) u 1983. razvio Myullis Cary (SAD), za koji je 1993. godine dobio je Nobelovu nagradu za kemiju.

PCR analiza za većinu infekcija postala neka vrsta „zlatni standard”. Većina stručnjaka suočeni s njim gotovo svaki dan, a nisu bez konačne dijagnoze. PCR je često samo za detekciju reakcije aktivnih stupnjevima bolesti u trenucima kada drugi ne uspijevaju bakteriološkog virološki i imunološkim dijagnostičkim metodama.

Prednosti PCR dijagnostika u modernoj medicini:

• izravno otkrivanje prisutnosti patogena (tj, određeni dio DNA ili RNA) patogena u uzorku.
• Visoka specifičnost omogućuje definiranje jedinstvenog protežu od DNA ili RNA karakteristične za određenu patogena, što eliminira mogućnost lažno pozitivnih nalaza.
• visoka osjetljivost metode PCR može otkriti čak i pojedinačne stanice patogena (virusa, bakterija). Osjetljivost PCR je 10-1000 u uzorku stanica (na primjer, osjetljivost imunoloških testova i mikroskopski - Samo 103-105 stanice).
• razvoj univerzalnog PCR tehnike za detekciju različitih patogena. Predmet istraživanja za PCR je genetski materijal (DNA, RNA) patogena. Ovaj postupak omogućuje identifikaciju nekoliko patogena iz biološkog uzorka.
• proizvesti rezultate dovoljno brzo analiza. Potpuni istraga provodi za 4-4,5 sata, najmanje - malo duže.
• sposobnost otkrivanja uzročnicima simptoma bolesti (predklinička Diagnostics) i zatim se prenose bolesti (retrospektivna dijagnoza). Primjer pretkliničkim dijagnoze će biti ispitan u razdoblju inkubacije (od trenutka zaraze do pojave pritužbe pacijenta), kao i latentne infekcije (kada nema simptoma na sve, ali samo laboratorijski podaci - PCR, na primjer). Jedan od vrhunaca PCR dijagnostiku je izvođenje PCR u arhivskog materijala ili bioloških ostataka, što je važno za identifikaciju ili očinstva.

Trenutno, PCR dijagnostika prolazi značajan razvoj. Ide poboljšanje metoda, vrijeme i opet ima novih sorti PCR, medicinski tržište dobiva novi sustav testiranja za ovu reakciju. Tako je cijena analize je postala dostupna za širok raspon pacijenata svake godine.

Što je temelj PCR metodom

Temelj za lančanu reakciju polimeraze ponavlja udvostručuje (amplifikaciju) određenog dijela DNA ili RNA pomoću enzima in vitro. Rezultat je količina DNA ili RNA koja je dovoljna za vizualne analize. Studija se kopira samo dio koji odgovara navedenim uvjetima, i to samo u situaciji njegove prisutnosti u ispitnom uzorku.

Na primjer, materijal za istraživanje, sumnja da sadrži DNA fragmenata ili RNA patogena (sline, urina, krvi, genitalnog pražnjenje) se stavi u reaktor (posebnom termalni ciklički uređaj). Dodatno tome se doda specifična enzima koji se vežu na patogen DNA ili RNA, te sintezu kopiji. Ona dolazi u nekoliko faza „lančanu reakciju” tipa, i na kraju jedan primjerak genetskog materijala može se dobiti i stotine tisuća primjeraka. Tada dolazi analizu i usporedbu rezultata s dostupne baze podataka o strukturi različitih patogena. Kroz PCR moguće je ne samo za identifikaciju vrsta patogena, ali i dati kvantitativnu rezultat analize, koja je, kako mnogi patogeni u ljudskom tijelu.

PCR trenutno širi krug mogućnosti istraživanja u uvodu mutacija, lanaca DNA fragmenata, i naširoko koristi u medicini, primjerice, utvrditi očinstvo, nastanak novih gena i tako dalje.

Što infekcija može biti otkriven PCR dijagnostika

1) HIV infekcija (može detektirati virusa humane imunodeficijencije HIV-1)
2) Virusni hepatitis A, B, C, G (HAV RNA, DNA-HBV, HCV RNA, RNA-HGV)
3) infektivna mononukleoza (Epstein-Barr DNA -VEB)
4) citomegalovirus (CMV-DNA)
5) infekcija Herpes (herpes simplex virus DNA HSV tipa 1 i 2)
6) STI (Seksualno prenosive infekcije po) - ureaplasmosis, bakterijska vaginoza, klamidija, mikoplazmoza, trihomonijazu,
7) tuberkuloza (Mycobacterium tuberculosis)
8) onkogenim virusima - papilloma virusom (humani papiloma virus (uključujući njegove onkogenih tipova 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 i 59)
9) borreliozu, krpeljnog encefalitisa
10) listerioze
11) Candida (gljivice Candida roda)
12) Helicobacter infekcija (Helicobacter pylori)
i drugi

S obzirom na niz patogena, PCR dijagnostika je naširoko koristi u ginekološkoj, mokraćnog praksa, praksa, zaraznih bolesti, pulmologiju, TB, gastroenterologije, hematologiju, onkologiju i drugi.

Materijal za proučavanje i pravila njezine ograde

Materijal za PCR analizu, koji se mogu identificirati stranih DNA bakterija ili DNA ili RNA virusa može poslužiti različite biološke okoliš i ljudske tekućine: mukusa urin, krv, sputum, struganje epitelne stanice, tkiva, placenta, krv, sok prostate, amnionska tekućina, pleuralni tekućine.

Kada screening za spolno prenosivih infekcija (Spolne) između muškaraca i žena uzimaju se iz genitalnih organa, a brisa ili struže od cervikalnog brisa ili struže iz uretre (mokraćne cijevi), urin.

Kada skrining za infekciju (herpes infekcije, CMV infekcije, mononukleoze, toksoplazmoza, hepatitis B i C, HIV) PCR povlačenje krvi.

Za dijagnozu infektivne mononukleoze, infekcije citomegalovirusom, herpes infekcija grla bris se uzima za probir za CMV - urinu. Često, za istraživanje o oštećenja živčanog sustava u velikom broju istraživanja poduzetih cerebrospinalne tekućine.

U pulmologiju materijala ispljuvak, pleuralni tekućine.

Kada skrining za infekcije fetusa - amnionske tekućine, tkiva posteljice.

Priprema za dostavu tvari i obavljanje dijagnostika PCR

Gotovo svi pacijenti podvrgavaju PCR dijagnostiku, može računati na pouzdane, točne i brze rezultate, što ovisi u velikoj mjeri o mogućnostima laboratorija, stručnih laboratorijskih liječnika. U isto vrijeme, mnogi ne shvaćaju da je najpouzdaniji u velikoj mjeri ovisi o nama samima, naime, o preporukama Liječnik, stil života, a ispravnost ograde materijala. Kada se ograda materijal potrebni uvjeti bez onečišćenja (zagađenja) materijala i, dakle, pitanje objektivnost analize.

Pravilna priprema za isporuku materijala ne predstavlja nikakve teškoće. Sljede liječničke preporuke za pacijente:

1) ne imati spolni odnos dan prije datuma materiala-
2) u krvi za istraživanja bavila ujutro na prazan želudac (ne jesti, piti) -
3) U vrijeme kada je prvi jutarnji urin ide dio u čistu sterilnu posudu.

Datumi spremnost PCR

Konačni rezultat je spreman na 1,5-2 dana nakon dostave materijala. U nekim slučajevima, rezultat je spreman za prvi dan.

Dešifriranje rezultata PCR

negativan PCR rezultat pokazuje da je ispitni materijal u trenutku isporuke nisu pronašli nikakve tragove infektivnih agenasa. Većina slučajeva pokazuje nedostatak infekcije, koja pokušava pronaći u ispitnom uzorku.

pozitivan PCR rezultat ukazuje na detekciju tragova infekcije u ispitnom biološkom uzorku. S velikom preciznošću pozitivan rezultat ukazuje na prisutnost infekcije u određenom vremenu.

Postoje situacije kada PCR je pozitivan, ali aktivne infekcije ne može govoriti - tzv „zdrave prijevoznika” bez kliničkih simptoma bolesti, koji ne zahtijeva liječenje, ali zahtijeva dinamičku nadzor od strane liječnika. Javlja se češće u nekoliko virusnih infekcija (HPV, CMV, EBV infekcije, herpes infekcija, i drugi) u materijalima kao što su slina, struganje maternice, uretra, to jest, iz lokalnog fokusa. Međutim, ne smijemo zaboraviti da je prijenos infekcije s prijevoznicima u zdravih ljudi može, kao prijelaz u kronični oblik bolesti s procesom aktivacije. Ako je PCR pozitivan u krvi, onda je to bez nosača, i zahtijeva posebno liječenje.

Kvantitativni PCR ocjenjuje od strane liječnika pojedinačno za određeni infekcije odvojeno i nema zajedničkih tonova. Na temelju rezultata kvantitativnog PCR liječnik može odrediti razinu aktivnosti od infekcije i izložiti stadij bolesti, što je svakako utjecati na tijek i droga dozu propisano.

Jedan od posljednjih pitanja koja se tiču: Koliko su točne PCR dijagnostiku?

3 je definicija za PCR analizu:

1. Točnost (s velikom vjerojatnošću može prepoznati ili odsustvo zaraze).
2. specifičnost (točnost detekcije određenog infekcije).
3. Osjetljivost (čak i pri niskim razinama patogena genetskog materijala u uzorku detektira infekcije).

Lančana reakcija polimeraze se gotovo ne daje neistinit (tj, nema pozitivnih uzoraka gdje je infekcija odsutan). Lažno negativni rezultati su rijetki (najčešće je to zbog nedostatka aktivne infekcije u ljudi u ovom trenutku). Na primjer, latentne infekcije, aktivni kronični infekcija.